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蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测
发布时间:2019-07-14   点击次数:456次

蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测
酶抑制率法(分光光度法)专用试剂使用说明
      本试剂为国家标准快速检验方法GB/T5009.199-2003的专用配套试剂。酶活性和对农药的灵敏度指标均达到或超过了国家标准要求,可以在各种型号的农药残毒检测仪(分光光度法)上使用,具有稳定性好、灵敏度高和使用方便等特点。
一、试剂配制
1. 缓冲液试剂: 整包倒入大烧杯中,加1000mL纯净水溶解,酸碱度为pH8.0,常温保存;
2. 乙酰胆碱酯酶: 取一支酶粉加20mL缓冲溶液溶解,4℃冰箱中保存,一周内用完。也可将溶解后的酶液分成几个小瓶,将其冷冻,用时融化,但不能重复多次冷冻、化解。
3. 显色剂: 取一支显色剂加入20mL缓冲溶液,避光保存;
4. 底物:取一支底物加20mL缓冲溶液,摇匀后置4℃冰箱中保存;
二、分析步骤
1. 样品处理: 选取有代表性的蔬菜样品,冲洗掉表面泥土,剪成1cm左右见方碎片,取样品1g,(非叶菜类取2g)放入烧杯或提取瓶中,加入5mL缓冲溶液,手摇振荡1~2分钟,或超声波振荡30秒钟,倒出提取液,静置3~5min,待用。
2. 对照溶液测试: 先于试管中加入100微升酶液和100微升显色剂,再加入2.5mL缓冲溶液,摇匀后于37°C放置15min,加入100微升底物摇匀,此时检液开始显色反应,应立即放入仪器比色池中,记录初始吸光度A1和反应3 min时的吸光度A2,A2-A1=DA0。
3. 样品溶液测试: 先于试管中加入100微升酶液和100微升显色剂,再加入2.5mL样品提取液,其它操作与对照溶液测试相同,记录初始吸光度A1和反应3 min时的吸光度A2,A2-A1=DAt。
三、结果计算
结果以酶被抑制的程度(抑制率)表示。
抑制率(%)=[ (DA0-DAt)/ DA0]×100
      当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时,表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在,样品为阳性结果。阳性结果的样品需要重复检验2次以上。
      对阳性结果的样品,可用其它方法进一步确定具体农药品种和含量。
四、注意
1. 每批样品的控制时间、温度条件必须与对照溶液的条件完全一致。
2. 葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中,含有对酶有影响的植物次生物质,容易产生假阳性。处理这类样品时,不要剪的太碎。对一些含叶绿素较高的蔬菜,也不要剪的太碎。
3. 当温度条件低于37°C,酶反应的速度随之放慢,加入酶液和显色剂后放置反应的时间应相对延长,延长时间的确定,应以胆碱酯酶对照溶液测试得到的吸光度A2-A1≥ 0.3以上,即可往下操作。当对照溶液酶液的加入量大一些时,也可使A2-A1≥0.3上。
4. 当吸光度大到无法读取时,说明测定液浑浊有干扰。
五、产品有关技术指标
1. 代表性农药的检出下限见下表
农药名称 检出限mg/kg 标准要求检出限mg/kg
甲安磷 0.65 2.0
氧华了果 0.5 0.8
2敌畏 0.01 0.1
呋南丹 0.01 0.3
2. 乙酰胆碱酯酶的活性:(室温20°C以上进行实验)DA0≥0.3。
六、包装及保存条件
每包可做200份样品,0°C以下冰箱冷冻保质期为三年,配成试剂后保存期为一周。

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